18 |
Klinisk Biokemi i Norden · 3 2016
terapeutiske peptider til klinisk brug, vil det åbne op
for ny forståelse af det endogene respons til eksogen
terapi. Samme forskergruppe identificerede for øvrigt
også en trunkeret form af plasma C-peptid (3-31), som
cirkulerede i øgede koncentrationer i patienter med
type 2 diabetes (11).
Variation af signal-intensitet i MALDI afhænger
bl.a. af effekter fra matrix-opløsningen og fra instru-
mentkomponenter (12). For optimal kvantitering
kræves der derfor brug af interne standarder, såsom
isotopmærkede peptider (5) eller kovalent modifice-
rede proteiner (6). De interne standarder kan tilsættes
inden prøveforberedelsen, og de ovennævnte studier
har alle opnået acceptabel teknisk variation og linea-
ritet. Hele arbejdsgangen kan potentielt automatiseres
til rutinebrug (5)(10). Den største nuværende udfor-
dring for klinisk brug af immuno-MALDI er følsom-
hed. Hvis antistoffet krydsreagerer med højt kon-
centrerede proteiner, vil disse ikke let kunne vaskes
bort og vil dermed undertrykke peptid-signalet ved
MALDI analysen. Højt koncentrerede proteiner kan
også bringes med fra prøven ved uspecifik binding
til overfladen af magnetiske kugler og til plastik, og
ikke kun til selve antistoffet. Udvikling af immuno-
MALDI kræver derfor optimering af bindings-
og vasketrin, inklusive bindingstid, antistof versus
prøve-volumen, prøvefortynding og buffer sammen-
sætning (salt, detergent, blokerende BSA). Følsom-
heden vil desuden afhænge af peptidsekvensen. For
at et peptid overhovedet kan detekteres ved MALDI,
skal det kunne påføres en ladning, og meget små pep-
tider som indeholder en eller flere sure eller basiske
aminosyrer, vil generelt give det stærkeste signal i en
MALDI analyse. Typisk har immuno-MALDI studier
benyttet velkarakteriserede antistoffer, der allerede
har demonstreret deres anvendelighed, for eksempel
i kliniske ELISA, og denne strategi er velegnet til
proof-of-concept studier. Men sådanne antistoffer er
netop udviklet med henblik på traditionelle immun-
metoder og vil ikke nødvendigvis være anvendelige
eller optimale for immuno-MALDI. For at forbedre
følsomheden i immuno-MALDI kan det derfor være
nødvendigt at udvikle antistoffer specifikt med hen-
blik på immuno-MALDI analyse. Endelig er der
spørgsmålet om økonomi. Anskaffelsesprisen for et
MALDI instrument og software er rundt regnet en
million kr. (13), og dertil følger udgifter til reagenser
og løn. Immuno-MALDI vil sandsynligvis ikke være
billigere end eksisterende og højsensitive immuno-
metoder, som koster cirka 100 kr. per analyse, alt
inkl. Det er nok ikke realistisk at immuno-MALDI
for nuværende kan udkonkurrere etablerede kliniske
immunmetoder, men immuno-MALDI vil måske
kunne spille en rolle for udvalgte peptider. Immuno-
MALDI tillader som nævnt direkte måling af plasma
insulin, også i tilstedeværelse af terapeutisk insulin,
og kunne være et interessant alternativ til C-peptid
målinger. Et andet eksempel er immuno-MALDI af
vassopressin, som i dag ofte måles i surrogatform
som copeptin.
Endnu har ingen massespektrometri-platform
bevist sin kliniske anvendelighed i rutineanalyser af
lavt koncentrerede proteiner eller peptider i plasma
(14). I modsætning til LCMS-baserede metoder, så
er MALDI-platformen robust og brugervenlig og
har allerede demonstreret sin anvendelighed i ruti-
neanalyser. I immuno-MALDI sker kvantitering
ved en direkte måling af det relevante peptid, som er
identificeret ved dets unikke og præcise molekylvægt,
og ikke, som i traditionelle immunmetoder, ved en
indirekte reaktionsproces. Immuno-MALDI kan
derfor bruges til kritisk validering af eksisterende
kliniske immunmetoder, og metoden åbner op for
nye diagnostiske muligheder.
Referencer
1. Sparbier K, Wenzel T, Dihazi H, Blaschke
S, Müller G-A, Deelder A, et al. Immuno-
MALDI-TOFMS: new perspectives for clinical
applications of mass spectrometry. Proteomics
2009;9:1442–50.
2. Patel R. MALDI-TOF MS for the diagnosis of
infectious diseases. Clin Chem 2015;61:100–11.
3. Hortin GL. The MALDI-TOF mass spectro-
metric view of the plasma proteome and pep-
tidome. Clin Chem 2006;52:1223–37.
4. Albrethsen J. The first decade of MALDI pro-
tein profiling: a lesson in translational biomar-
ker research. J Proteomics 2011;74:765–73.
5. Popp R, Malmstr.m D, Chambers AG, Lin
D, Camenzind AG, van der Gugten JG, et al.
An automated assay for the clinical measu-
rement of plasma renin activity by immuno-
MALDI (iMALDI). Biochim Biophys Acta
2015;1854:547–58.
6. Meyer K, Ueland PM. Targeted quantification
