Klinisk Biokemi i Norden · 3 2016
| 17
for en given epitop. Et velkendt problem fra ELISA og
RIA-målinger er dog uspecifik binding (7). Men her
har immuno-MALDI en potentiel fordel. I immuno-
MALDI er selve kvantiteringen baseret på intensiteten
af en specifik top i et masse-spektrum, som speci-
fikt svarer til det relevante peptid. Hvis antistoffet
krydsreagerer med andre peptider og proteiner end
det ønskede, vil disse fremstå som separate toppe i et
masse-spektrum og ikke bidrage til kvantiteringen af
det relevante peptid. Immuno-MALDI kunne derfor
tænkes at have et potentiale ved validering og forbed-
ring af allerede etablerede antistof-baserede måle-
metoder. En yderligere fordel er, at immuno-MALDI
kan skelne mellem isoformer, såsom modificerede
eller trunkerede varianter af et peptid. Til sammen-
ligning beror ELISA og RIA-baseret kvantitering på
en samlet måling af alle forekommende isoformer
af et peptid, der indeholder den antistof-bindende
epitop (typisk en kort sekvens på 5-7 aminosyrer). I
immuno-MALDI vil et trunkeret peptid optræde som
en top med en lavere masse, hvorimod for eksempel
et glykosyleret peptid vil optræde med højere masse
(Figur 1B). Dette åbner op for muligheden for parallel
kvantitering af isoformer af et peptid, hvilket kan have
stor diagnostisk betydning (8). Ved brug af immuno-
MALDI dokumenterede Niederkofler et al. først, at
BNP nedbrydes i plasma i fravær af høje mængder af
protease-hæmmere. Dernæst viste immuno-MALDI
målinger, at plasma BNP 1-32 (det aktive hormon)
var til stede i relativt lave mængder (20-40 ng/L) hos
en gruppe patienter med hjertesvigt, men at plasmaet
også indeholdt flere ukendte BNP-fragmenter. Ifølge
den etablerede målemetode var plasma BNP koncen-
trationen >50 gange højere i samme patientgruppe
(9). Denne forskel kunne netop forklares ved, at den
etablerede antistof-baserede metode måler på sum-
men af alle peptid-isoformer, inklusive ikke-aktive
og trunkerede former, mens immuno-MALDI måler
specifikke isoformer individuelt. Oran et al. udviklede
immuno-MALDI til kvantitering af plasma insulin
(5,8 kDa) ned til <10 ng/L (<2 pM) og identificerede
en modificeret form af insulin (des-thr30-insulin),
som ellers kun tidligere er identificeret i urin, foruden
tilstedeværelsen af en trunkeret form af det terapeu-
tiske insulin-præparat Lantus (10). Studiet fra Oran
et al. tydeliggør derfor, at immuno-MALDI har et
særligt potentiale til måling af endogene versus tera-
peutiske peptider i plasma. Og med efterhåndenmange
Figur 1
A
Isotopmærket peptidstandard tilsættes plasma. Prøven
inkuberes med antistof koblet til magnetiske kugler, og uøn-
skede proteiner vaskes bort. Komplekset af antistof og peptid
måles med MALDI-TOF MS.
B
Forskellige isoformer af et
peptid vil have forskellige molekylvægte og kan detekteres
individuelt i samme immuno-MALDI analyse.
