behandling rettet mod HER2 (2). Der er derfor
stor interesse for at kunne kvantitere netop dette
gen. Vi har etableret en analyse for HER2 DNA på
Ligtcyeler. Analysen kan med stor sikkerhed
skelne mellem biopsier hvor antailet af HER2
gener er fordoblet og biopsier uden HER2 gen
amplifikation. Metoden har en nekke fordele i for–
hold til FISH og immunohistokemi , de metoder
der almindeligvis anvendes til at bestemme HER2.
Lighteyeler-analysen kan standardiseres og kvali–
tetssikres efter gcengse klinisk biokemiske stan–
darder, analysetiden er relativ kort og analysen er
forholdsvis prisbillig.
EGF vrekstfaktor systemets ekspression,
måling af
mRNA:
Epidermal vcekstfaktor systemet bestär ud over
HER2 af en lang rcekke receptorer og endnu flere
ligander. Systemet er af betydning for den nor–
male vcekst, men spiller ogsä en rolle i forbindelse
med malign vcekst. Vi udviklede traditionelle
kvantitative analyser til mäling af en rcekke speci–
fikke mRNA molekyler fra EGF systemet (3,4),
og viste blandt andet at EGF systemets ekspres–
sion korrelerer til overlevelse hos patienter med
blceretumorer (5). Vore metoder har umiddelbart
kunnet overflyttes til Lightcycler. Det g0r det
muligt at detektere meget små mcengder mRNA
(ned til 10 RNA kopier) og at kvantitere mRNA
indholdet over et stort range
(l
0-100 kopier).
Samtidig er lighteyeler teknologien betydeligt
hurtigere og simplere end den traditionelle kvan–
titative PCR metode.
Detektion af melanomceller i perifert blod
Det er vigtigt at kunne finde de melanompatien–
ter, der har en risiko for at fä metastaser. Muligvis
kan dette gl')res ved mäling af melanomspecifikt
mRNA i perifert blod eller i "sentinel nodes" (den
lymfeknude, der drcenerer primcer tumor). Vi har
udviklet nested RT-PCR for den melanomspeci–
fikke MART-l (SI')rensen et al. 2000b), og ogsä
denne analyse har med fordel kunnet etableres på
Lightcyeler.
24
KONKLUSION
Real time PCR teknikken- og dermed Lighteyele–
ren- giver en god mulighed for at kvantitere ampli–
fikation af gener, ogsä selv om genet kun er ampli–
ficeret i begrcenset omfang. Ogsä til kvantitering af
mRNA er Lighteyeler et godt bud. Kvantireringen
kan ske ved brug af en standardkurve og lillader at
kontrolprl')ver medtages med henblik på ll')bende
monitorering af kvaliteten. En rcekke undersl')–
gelser har desuden vist at Lighteyeler er velegnet
til detektion af polymorfler og mutationer.
Endelig må det ncevnes at man med Lighteyele–
ren kan kvantitere DNA eller RNA på under en
time. Dette kombineret med hurtigere metoder til
DNA og RNA oprensning giver perspekliver for
en meget hurtig analyse af patientprl')ver.
Referencer:
l. Nitsche A, Steuer N, Schmidt CA, Landt O, and
Siegert
W.
(1999) Different real-time PCR for–
mats for the quantitative detection of human cyto–
megalovirus DNA. Clin. Chem. 45, 1932-1937.
2. Ross JS and Fletcher JA. (1998) The
HER2/neu oncogene in breast cancer: Prognos–
tic factor, predielive factor and target for the–
rapy. Oncologist 3, 237-252.
3. Bor MY, Sorensen BS, Rammer P, Nexo E.
(1998) Calibrated user-friendly reverse trans–
criptase-PeR assay: quantitation of epidermal
growth factor receptor mRNA. Clin Chem;
44:1154-60.
4. Sorensen BS, Torring N, Bor MV, Nexo E.
(2000a) Quantitation of the mRNA expression of
the epidermal growth factor system: selective
induction of heparin-binding epidermal growth
factor- like growth factor and amphiregulin
expression by growth factor stimulation of pro–
state stromal cells. J Lab Clin Med; 136:209-17.
5. Thogersen VB, Sorensen BS , Poulsen
SS ,
Omtoft TF, Wolf H, Nexo E. (200
l )
A subdass of
HERl ligands are prognostic markers for survi–
val in bladder cancer patients. Cancer Res;
61 :6227-33.
6. Sorensen BS , Schmidt H, von der MH, Straten
PT, Nexo E. (2000b) Quantification of meJa–
norna cell-specific MART-l mRNA in periphe–
ral blood by a calibrated competitive reverse
transcription-PCR. Clin Chem;46:1923-8.
Klinisk Kjemi i Norden 3, 2001
