...J
<t
z
!2
(/)
Suf
Ag
Ab
! !
Endpoint
l
g
G
~
.----- -- ---- -------
...
--------- ---
1st
2nd
TIME
TIME
Fig. l . Signaludvikling som f unktion aftid efter suc–
cessiv tilscetning afbujfer, antigen og antistoj
tilsrettes reaktionsbufferen. Derefter tilblan–
des patientpmven, og efter en farinkubering
på 120 sek. , afl reses turbiditeten. Denne f0rste
aflresning reprresenterer pmvens blindvrerdi ,
og den gemmes i instrumentets hukommelse.
F0rst nu tilblandes det monospecifikke anti–
stof, og turbiditeten 0ges i takt med antigen–
antistor reaktionen.
Når turbiditeten har stabiliseret sig - efter
4-6 minutter - aflreses anden gang. Differen–
cen mellem 2. og l . aflresning udg0r antigen–
antistor reaktionens signal og kan relateres til
antigenkoncentrationen, evt. efter korrektion
for antistoffets egen turbiditet (reagens blank).
2. Momentan sammenblanding og aflcesning
(end-point måling)
Nogle maskiner fungerer imidlertid efter et
andet princip, hvad angår tilblanding af anti–
stofog aflresning af signaler. Initialt sammen–
blandes reaktionsbufferen, patientpmven og
antistoffet. Derefter, så hurtigt som muligt -
og det vii normalt vrere 5-10 sek. efter sam–
menblandingen - foretages
l .
aflresning.
Når turbiditeten har nået sit maksimum -
efter 4-6 minutter - aflreses
2.
gang. Proble–
met er her for det f0rste , at 5-1 O sek. er for
kort tid til , at pmvens eget signal når at stabili–
sere sig. Dette krrever normalt ca. 2 minutter.
For det andet er reaktionskinetikkeD mellem
antigen og antistof meget forskellig for de en–
kelte proteiner. For hurtigt reagerende prote-
Klinisk kemi
i
Norden
Fig. 2. Signaludvikling og ajlcesningstidspunkter ved
momentan sammenblanding af bujfer, antigen og
antistoj (JgG).
iner, som
f.
eks. lgG, vii halvdelen af signalet
vrere gået tabt inden l . aflresning (se figur 2).
Dette får en dramatisk effekt på standard–
kurvens forl0b, idet signaHabet er st0rst ved
de h0je proteinkoncentrationer. Kurveforl0-
bet bliver derfor mere affladet, hvilket giver
st0rre usikkerhed ved interpolation (figur 3).
3. Reaktionshastighed (kinetisk måling)
Det tredie princip består i at aflrese signal–
tilvreksten pr. tidsenhed og så anvende maksi–
malvrerdien- rate max. - som udtryk for reak-
l
g
G
Real sample blanklog
Initial mlxlng
and
blanklng
5 Rel.conc.
Fig. 3. Standardkurvens forlob optegnet efter de to
principper: /Egte prove blank og momentan sam–
menblanding.
13
