escensfotonet sendes ut. Grunnen antas å vcere at
4-f orbitalene i N skallet ligger forholdsvis dypt
nede i ionet og således blir beskyttet av elektro–
nene i de utenforliggende
0-
og P-skallene mot
ytre påvirkninger. Lysemisjonen fra lanthanidio–
net i et fluorescerende chelat svekkes imidlertid
på vanlig måte med l')kende temperatur. Hvis
mekanismen hadde vcert direkte quenching av
f. eks. eksitert Eu
3
+,
ville levetiden av fluorescen–
sen gått ned tilsvarende. Så er imidlertid ikke til–
felle, og det tyder på at det meste av quenchingen
skjer f0r eksitasjonsenergien har nådd frem til
Eu
3
+
(4).
Fluorescensmålingmed tidsdiskriminering
Den Iange halveringstiden for fluorescensen fra
Eu
3
+
og andre lanthanider utnyttes i DELFIA®
fluorometeret (1,2). Prinsippet for «time resolved
fluorometry» er eksitasjon med kortvarige lys–
glimt (ca. et mikrosekund), hvoretter fluorescen–
sen mäles etter en forsinkelse på noen hundre
mikrosekunder. «Prompt fluorescence» fra for–
urensilinger er da for lengst klinget av. Spredt
eksitasjonslys kan selvsagt heller ikke forstyrre
en slik forsinket måling. Den feilkilden som blir
tilbake, er (langlivet) fosforescens fra forurens-
S=C=N~f\f\
N
N
N
( ( ("'1
coo- coo- coo- coo-
~\
!/
Eu
3
+
H
Protein-N:
+
S=C=N-R-Eu3+
H
s
"
3
Protein-NH-C-NH-R-Eu
+
KliniskKjemi
i
Norden 4. 2000
ninger i optiske komponenter og plastkyvetter.
Den sensitivitet man kan oppnå er derfor fl')rst og
fremst et spl')rsmål om renhet og kvalitet av de
materialer som benyttes.
Referanser
l.
Hemmilä
I.
Lanthanides as probes for time–
resolved fluorometric immunoassays. Scand
J Clin Lab Invest 1988; 48: 389-400.
2. StåhlbergT, MarkelaE, MikolaH, Mottram P,
Hemrnilä
I.
Buropium and samarium in time–
resolved fluoroimrnuno-assays. International
Laboratory 1994;
13:
14-8.
3. SinhaAPB. Fluorescence and LaserAction in
Rare Earth Chelates. i Spectroscopy in
Inorganic Chemistry, bind 2, ss 255-65. 1971.
4. WeissmanSI. IntramolekularEnergyTransfer.
The Fluorescence ofComplexes ofEuropium.
J
Chem Phys 1942;
10:
214-7.
5. Crosby GA, Whan RE, Alire RM. lntramole–
cular Energy Transfer in Rare Earth Chelates.
Role of the Tripiet State.
J
Chem Phys 1961;
34: 743-8.
Figur l. Chefaret som brukes til åmerke aminagrupper
med europium (()verst). Liganden er Nl-(P-isotiocyan–
atobenzyl)-dierylentriamin-Nl ,N2 ,N3
,N
J
-tetraeddikk–
syre. Reaksjonen består i at det frie elektronpar som
aminogruppen har
i
uladet form, reagerer nukleofilt
med karbonatornet
i
isotiocyanatgruppen (nederst) .
19
