er den indre diameteren på kapiii <eret som bestern–
mer lysveien , som regel mellom 25 og
lOOf..Ull.
Sammenliknet med lysveien i en HPLC detektor–
celle (fra 2-10 mm) blir resultatet at det er langt
f<erre molekyler i lysveien samtidig i CE enn i
HPLC.
For å bedre konsentrasjonsf0lsomheten benyt–
tes flere forskjellige teknikker.
Dette dreier seg enten om bruk av andre detek–
torer enn UV og diode-array (DAD), eller om tek–
nikker for å oppkonsentrere pr0ven f0r eller under
analysen.
2.1 Bruk av andre deteksjonsprinsipper.
Det er utviklet såkalte bobleeeller og Z-celler for
å 0ke lysveien ved UV eller DAD. Bruk av kapil–
l<erer med slike celler bedrer deteksjonsgrensene
med inntil ca. 10 ganger. For enkelte applikasjo–
ner kan dette v<ere tilstrekkelig, men i mange til–
feller, spesielt for applikasjoner innen klinisk kje–
mi vil ikke dette v<ere nok. Bruk av laser indusert
fluorescens (LIF) er gunstig for bestemmelse av
fluorescerende forbindel ser. Eksempler på detteer
enkelte cytostatika, og deteksjonsgrensene bedres
ofte med en faktor på ca l 000 ved å bruke en LIF
detektor sammenliknet med UV. For forbindelser
som ikke er selvfluorescerene kan derivatiserings–
reaksjoner utf0res for å innf0re fluorescerende kro–
moforer på analytten. Ulempen med bruk av slike
reagenser er at de er relativt dyre, og at derivatise–
ringstrinnet kan v<ere tidkrevende. Kobling av
massespektrameter (MS) til CE har også 0kt mye
i bruk de senere år. Fordelen ved bruk av MS som
detektor er at det muliggj0r besternruelse av for–
bindelser som ikke absorberer UV-lys, i tillegg til
at det resulterende massespekteret gir en meget
sikker identifisering av analytten. Bruk av elek–
trokjemisk deteksjon muliggj0r også meget selek–
tiv deteksjon av en del forbindelser.
2.2 Oppkonsentrering
f";r
eller under analysen
En av de mest brukte teknikkene for oppkonsen–
trering under analysen er
stacking,
hvor pr0ven
injiseres i et organisk 10sningsmiddel. Forskjell i
ledningsevne mellom pr0vesonen og separasjons–
elektrolytten vii f0re til at analyttene oppkonsen–
treres i overgangen mellom disse to sonene.
lsota–
choforese
kan også gi en betydelig oppkonsentre–
ring av analyttene.
Klinisk Kemi
i
Norden
2.
1998
On-line oppkonsentrering har blitt viet mye
oppmerksomhet spesielt det siste året(5). Det festes
da en liten enhe, en såkalt analytt-konsentrator på
inngangsenden av kapill<eret. Analytt-konsentrat–
oren er pakket med et kromatagrafisk materiale,
f.eks. C-18 eller ionebyttermateriale og prinsippet
er tilsvarende fast-fase ekstraksjon. Pr0ven (fex.
serum eller urin) injiseres i et stort volum ( opp til
ca. l 00
J.!L),
og analytten vii fes te seg til det
kromatografiske materialet i analytt-konsentrat–
oren, mens resten av 10sningen (matriks) vii passere
gjennom kapill<eret og til waste. Neste steg er
vasking, hvor det innf0res en ]IZ)sning, som regel
separasjonsbufferen. Analytten vii fremdeles sitte
fast på det kromatografiske materialet, mens
forurensninger og resten av matriks vaskes ut av
systemet. Det injiseres så et meget lite volum av
et organisk l0sningsmiddel, f.eks. metanol eller
acetonitril. Analytten vii 10sne fra materialet og
f0res med det organiske 10sningsmiddelet inn i
analysekapill<eret.
Deretter settes det på spenning og analysen
fullf0res som normalt. Med denne teknikken kan
det oppnår en oppkonsentrering med en faktor på
1000.
Denne oppkonsentreringsteknikken er spesielt
interessant for analyse av fysiologiske v<esker, hvor
konsentrasjonen av analytten ofte er meget lav.
3. Sammenlikning med andre
kromatografiske teknikker
3.1 Sammenlikning
CE
og
HPLC :
Mange av separasjonene som utf0res på HPLC i
dag kan gj0res ved bruk av CE.
De store fordelene med CE i denne sammen–
hengen er et meget lavt forbruk av 10sninger, og
spesielt organiske 10sningsmidler. Det kan enkelt
forstås når vi vet at total volum et av en
kapill<erelektroforese-kolonne er noen få microliter
(J.!L).
Analysekostnadene for en CE separasjon lig–
ger generelt på 1-2% av de samme utgifter ved
bruk av omvendt fase HPLC.
Kolonnematerialet er vesentlig billigere enn
HPLC- kolonne og kan generelt brukes til minst
like mange analyser.
En annen fordel er at selektivitet og analysetid
enkelt kan justeres i CE ved å variere kapill<erets
lengde og sammensetning av separasjonsbuffer.
Ved overf0ring av en applikasjon fra omvendt fase
45
