rades därefter av en annan organisation enligt en
lätt modifierad procedur och fick batch-beteck–
ningarna WHO 67/95, WHO 67/97, WHO 67/98
och WHO 67/99.
Reimer och medarbetare
3
i USA preparerade
under senare delen av 70-talet flera serumpooler
varav en valdes som referensmaterial för humana
serumproteiner. Hälften av dettamaterial frystorka–
des i flaskor(1,5 mL/flaska) som försågs med
gummiproppar och lagrades vid Center for Disease
Control med beteckningen "USNational Reference
Preparation for Serum Proteins" (USNRP). Den
andra hälften frystorkades i ampuller som smältes
igen och innehöll1,3 mLfampulL Den senare hälf–
ten fick status som "WHO Reference Preparation
for 6 Human Serum Proteins" eller WHO 6HSP
(albumin,
a
1
-antitrypsin, ceruloplasmin, a
2
-makro–
globulin, transterrin och C3).
I
USA åsattes senare massakoncentrationsvär–
den både USNRP och en bruksstandard framtagen
av CAP( College ofAmerican Pathologists), kallad
RPSP-1, genom ett konsensusförfarande omfat–
tande 24 olika laboratorier
4
•
Varje laboratorium
använde sina egna referensmaterial och spridningen
på de erhållna resultaten var därför stor. RPSP-1
användes därefter av ett stort antallaboratorier och
tillverkare av reagens. Många av de större dia–
gnoslikaföretagens kommersiella standarder har
därför varit kalibrerademot CAP's standarder RPSP
1- 3. När RPSP-1 var förbrukad preparerade CAP
RPSP-2 och därefter RPSP-3. För varje ny prepara–
tion åsattes värden återigen genom konsensus där
den tidigare CAP preparationen utgjorde referen–
sen; RPSP-2 ställdes sålunda mot RPSP-1
5
och
RPSP-3 mot RPSP-2.
Det visade sig senare nödvändigt att preparera
ytterligare en ny CAP-standard, RPSP-4, då det
blev uppenbart att RPSP-3 ej skulle räcka fram till
att den nya kalibratorn RPPHS, europeisk benäm–
ning CRM 470, blev tillgänglig. Den senare för–
väntades uppvisa helt andra koncentrationsnivåer
för flera proteiner varför CAP beslöt att åsätta
RPSP-4 värden enligt samma principer som har
använts av IFCC's kommitt
e
för CRM 470, i avsikt
att minimera ytterligare förändringar när den nya
internationella standarden blev tillgänglig. RPSP-
4
har varit tillgänglig i USA sedan 1991.
10
Preparationen av CRM 470
Alla processer som använts i preparationen av det
nya materialet har testats i pilotskalor och visat sig
resultera i ett mycket stabilt och optiskt klart mate–
rial som kan användas i alla vanliga immunkemiska
metoder. Dessutom har alla processer och data
dokumenterats i detalj så att materialet skall kunna
reproduceras när en ny framställning krävs . I kort–
het har preparationsstegen varit följande:
l.
Insamling av färskt serum, ungefår 175 mL
per givare, från flera hundra friska individer i 5
europeiska städer. Demografiska data för v a r j e
givare har dokumenterats såsom ras, kön, ålder,
vikt, blodgrupp och ursprungsland.
2. Varje individuell serumportion har testats med
avseende på följande smittämnen med tester god–
kända av Food and Drug Administration: HIV-1
och -2, HTLV-1, hepatit B surface antigen och
hepatit C antikroppar.
3. Varje individuell serumportion har testats
med avseende på förekomst av reumatoid faktor,
monoklonala immunglobulin band eller andra ab–
normiteter som kunnat identifieras med serum–
elektrofores.
4. Fenotyp av varje individ har dokumenterats
beträffande
a
1
-antitrypsin och haptoglobin.
5. Varje individuell serumportion har under–
sökts med hänsyn till förekomst av hämolys,
hyperbilirubinemi och turbiditet.
6. Alla serumportioner som visat avvikelser
eller närvaro av möjliga störande substanser i ovan–
nämnda tester har uteslutits.
7. Tillsats av natriumazid och därefter har de
individuella serumportionerna frysts innan de skick–
ats till ett centralt laboratorium för vidare prepara–
tion.
8.
Serumportionerna har tinats och sammansla–
gits varefter den samlade volymen delipiderats
med användning av kiseldioxid.
9. Natriumazid, aprotinin och benzamidin har
tillsatts.
10. Tillsats av rent C-reaktivt protein till en
slutkoncentration av ungefär 40 mg/L.
11. Justering av pH till 7,2 med HEPES buffert
följt av sterilfiltrering.
12.Preparationen har fyllts på flaskor(1,00 mL/
flaska), frystorkats och tillslutits.
Koncentrationsangivelser för CRM 470
CRM 470 har åsatts koncentrationsvärden i ett
Klini.sk kemi
i
Norden 4, 1993
