18 |
Klinisk Biokemi i Norden · 2 2019
havn og Nordsjælland) blev der i 2017 analyseret ca.
350.000 prøver for 25(OH)D, og det tyder ikke på, at
forbruget er gået ned siden. Der er således et klart
overforbrug af 25(OH)D analysen i Danmark i for-
hold til, hvad der anbefales. I tillæg kan patienterne
selv vælge, hvilket klinisk biokemiske laboratorium,
som de vil have taget prøver på, og dette stiller store
krav til standardisering af ikke bare 25(OH)D assays,
men naturligvis også til assays for en lang række
andre biokemiske parametre.
Projekt vedr. status for standardisering af assays
På baggrund af ovenstående valgte vi at gennem-
føre et forsøg, hvor formålet var at undersøge status
for standardisering af tilgængelige 25(OH)D assays
i Region Hovedstaden. Vi samlede 200 prøver fra
patienter, som alligevel skulle have målt 25(OH)D og
målte dem i duplikat med 6 forskellige immunassays
på automatiserede udstyr og ét LC-MS/MS assay (Tabel
2). Endvidere udførte vi dobbeltbestemmelse af NIST
standard reference material 972a (SRM972a)[9], som
indeholder fire niveauer af 25(OH)D
2
og 25(OH)D
3
samt varierende koncentrationer af 3-epi-25(OH)D
3
i humant serum. Ifølge VDSP bør assays hos slutbru-
gerne kunne opfylde et krav på CV < 10%. CV% i dette
blev beregnet ud fra de udførte dobbeltbestemmelser,
og vi fandt, at alle de testede assays opfyldte dette
krav (Tabel 3). Dog var der stor forskel på, hvor god
præcision de enkelte assays kunne præstere, idet CV%
varierede mellem 2,4 og 9,0%. Dernæst bestemte vi bias
i forhold til SRM972a. Her var der kun to assays, der
overholdt VDSP kravet for bias på < 5%, nemlig Liaison
XL og IDS iSYS, hvor den gennemsnitlige bias bereg-
net ud fra alle fire niveauer af SRM972a svingede fra
3 til 40% i de 7 testede assays (Tabel 3). Specielt så det
ud til, at for niveauer af SRM972a, hvor der var større
koncentrationer af 3-epi-25(OH)D3, var der stor bias
for de assays, som medbestemmer denne, men også
for niveauer af SRM972a omkring cut-off grænsen for
vitamin Dmangel på 50 nmol/l, hvor koncentrationen
af 3-epi-25(OH)D3 i SRM972a var lav, fandt vi stor bias
i forhold til standardprøven (fra -28 til +30% i bias).
Da så stor bias omkring en cut-off grænse kan
give problemer i forhold til diagnostik og monito-
rering af patienter med potentiel vitamin D mangel,
undersøgte vi, hvor gode de enkelte assays var til at
kategorisere patienterne ud fra de målte vitamin D
niveauer, da dette har stor klinisk betydning. Der er
ikke international konsensus om, hvordan vitamin
D mangel skal kategoriseres, idet forskellige arbejds-
grupper har udstukket forskellige retningslinjer for,
hvilke targetniveauer man bør sigte efter [8,10]. Vi
valgte derfor at beregne ud fra anbefalingerne fra en
ekspertgruppe fra Institute of Medicine, som angiver
følgende grænser: <30 nmol/l: vitamin D mangel;
30-50 nmol/l: inadækvat vitamin D; 50-125 nmol/l:
adækvat vitamin D; >125 nmol/l: høj vitamin D [10].
Der var stor uoverensstemmelse mellem de forskellige
Tabel 2:
Karakteristika ved de anvendte analysemetoder
Producent og udstyr
Måleprincip
Måleområde1
LLOQ
1
Sporbarhed
1
ng/mL
nmol/L
nmol/L
Siemens Healthineers
ADVIA Centaur XP
Kemiluminescence
immunassay (CLIA)
4.2 - 150 10.5 - 375
10.5
SRM 2972
TOSOH Bioscience
AIA900
Fluorescens enzyme
immunassay (FEIA)
4.0 - 120 10.0 - 300
NA SRM 2972
Roche Elecsys Cobas e411
1
st
generation
Elektrokemiluminescence
immunassay (ECLIA)
3.0 - 70
7.5 - 175
12.5
SRM 972
Ortho Clinical
Diagnostics Vitros 5600
Kemiluminescence
immunassay (CLIA)
8.0 - 150 20.0 - 375
20.0
In house
calibrators
DiaSorin Liaison XL
Kemiluminescence
immunassay (CLIA)
4.0 - 150 10.0 - 375
NA SRM 2972a
IDS-iSYS
Kemiluminescence
immunassay (CLIA)
4.0 - 110 10.0 - 275
8.83
SRM 2972
Waters UPLC triple
quadrupole LC-MS/MS
Liquid chromatography /
tandem mass spectrometry 4.0 - 200 10.0 - 500
10.0
SRM 2972a
1
Information fra assay inserts.
