![]()
23
| 3 | 2009
Klinisk Biokemi i Norden
(Fortsætter side 24)
Figur 4
. Princip i capture-ELISA til bestemmelse af IgG- klasse
PR3-ANCA.
Figur 5
. Patient med Wegeners granulomatose og højt initialt
niveau af PR3-ANCA ved såvel direkte som ved capture
PR3-ANCA ELISA-bestemmelse. Efter en tids behandling går
patienten i remission og PR3-ANCA-niveau bestemt med begge
metoder falder. Da patienten får ny sygdomseksacerbation
ses PR3-ANCA at være lav bestemt med direkte PR3-ANCA
ELISA, mens niveauet er steget klart bestemt ved capture
metode.
Hos patienter med reumatoid artrit, ulcerøs colit og
kronisk hepatit finder man IIF-mønstre, som er langt
mindre karakteristiske, varierende fra farving af hele
cellekærnen til farvning af kærnens membran med
eller uden farvning af det omliggende cytoplasma.
Disse såkaldte ”atypiske” ANCA-reaktioner viser blot,
at mange forskellige antistoffer mod neutrofilocytter
reagerer med hvert sit antigen i blandingsmønstre,
der ikke er så distinkte som ANCA (1, 9, 10). En
nøjagtig beskrivelse af teknikker, fortolkning og fejl-
muligheder findes i senere litteratur (1, 3).
Videre undersøgelse af NSA
Når IgG-NSA/ANCA er fundet med IIF-metode,
bliver det næste trin undersøgelse for antistoffer ret-
tet mod et klassisk ANCA-antigen. Dette sker i de
fleste tilfælde ved ELISA-teknik med anvendelse af et
oprenset granulumprotein som antigen, eksempelvis
PR3, MPO, EL eller BPI (1, 3)
Andre teknikker baseret på antigen direkte bun-
det til faste faser som f.eks. mikro-chips, Luminex-
partikler etc. anvendes på samme vis til identi-
fikation af antigenreaktivitet og kvantificering af
det specifikke antistof (1, 9, 10). Alle sera, som er
indsendt til ANCA undersøgelse på mistanke om
ANCA-associeret sygdom og som findes at indeholde
IgG NSA, skal videreundersøges, uanset hvilket IIF-
mønster man finder ved den primære undersøgelse,
da der meget vel kan gemme sig en klassisk ANCA
rettet mod PR3, MPO, EL eller BPI bag et ukarak-
teristisk NSA-mønster. Forekomst af ANCA rettet
mod BPI synes at få stor betydning i evaluering af
prognosen for patienter med cystisk fibrose (11). BPI-
ANCA forekommer dog tillige hyppigt ved ulcerøs
colit, infektioner i hjerteklapper eller shunter og ved
kronisk bronkitis og bronkiektaser, formentlig som et
led i bekæmpelse af bakterier, hvor BPI har en rolle i
bortskaffelsen af disse ved fagocytose (2).
Indirekte antigenbindingsmetoder
I de senere år er fremkommet fast-fase teknikker
baseret på indirekte binding af antigen – især PR3 –
ved hjælp af et specifikt monoklonalt museanti-
stof (”capture” antistof) som primært coated protein
(Fig. 4). Det specifikt bundne antigen vil her-
ved blive tilgængeligt for ANCA-reaktion med flere
epitoper på antigenet og formentlig tillige bevare en
mere nativ konformation, hvilket har betydning for
optimal antistofreaktion (1, 3). Med denne teknik
synes det nu sikkert, at en bedre monitorering af
ANCA-niveau kan ske. ANCA-niveauet afspejler i de
fleste tilfælde sygdomsaktivitet ved PR3-associerede
vaskulittilstande, således at niveauet stiger med øget
aktivitet (13). Således ser man positive fund ved
capture PR3-ANCA ELISA under sygdomseksacer-
bationer ved WG, mens direkte ELISA da kan give
negative resultater. Dette formodes at være betinget
af ANCA-reaktion med neoepitoper efter epitop-
spredning. Sådanne epitoper kan således skjules efter
direkte PR3-binding til plastik, men er frit reaktive i
binding til monoklonalt antistof eller evt. anden lig-
and. Et eksempel på dette illustreres i Fig. 5.
