Projektarbete
Ansvarig: Tor-ArneHagve, fax +47 22 86 70 29
Subtyping av lymfocytter på et helautomatisk
hematologi instrument
1
ASTRIDSTEIRO,ANTONINUSSOOSAIPILLAI,TOR-ARNEHAGVE,
2
BODILLUNDEN,FRED–
RIKMULLER
1
Klinisk-kjemisk avdeling, Rikshospitalet, 0027 Oslo,
2
Seksjon for klinisk immunologi og infektions–
medisin, Rikshospitalet, 0027 Oslo
Lymfocytter (og andre leukocytter) uttrykker en
rekke forskjelligemembranproteiner som gjor det
mulig å skille mellom ulike subpopulasjoner av
celler ved hjelp av monaklonale antistoffer. Det
dreier seg ofte om proteiner med receptor- eller
koreceptor-funksjon. Det er utviklet et system for
klassifisering avdemembranproteiner sombrukes
som cellemarkorer, det såkalte CD (Cluster of
Differentiation). Det er i dag definert 150 ulike
markorer (CD).
T-lyrnfocytter vil i lopet av sin differensiering
utvikle seg til to forskjellige populasjoner hvor
markorene CD4 og CD8 er spesifikk for hver av
populasjonene og gjor det mulig å skille disse.
Kvantitering avCD4 (T-hjelperceller) ogCD8 (T–
dreper celler) positiveT-lymfocytter har vist seg å
vrerenyttigveddiagnoseog ikkeminstvedkontroll
og vurdering av prognose hos HIV-positive pasi–
enter.VedHIV-infeksjonbindervirus seg spesifikt
til de celler som har CD4 receptorer på overfiaten
ognoe farenklet kanen si atdetkunerdissecellene
som blir virus-infisert. Dette medforer på sikt en
reduksjon i arrtall CD4-celler med en initial kom–
pensatoriskokningavCD8 celler. Etteretvariende
arrtall år er reduksjonen i antall CD4 celler blitt så
stor atpasienten utviklerAIDS.Arrtall CD4 celler
(og CD4/CD8 ratio) har vist seg å gi et bilde av
pasientens aktuelle tilstandoghvor langt sykdoms–
utviklingenharkommet. CD4ogCD8 typingharså
langt ikke vist segnyttigvedutredningikontroll (se
Klinisk Kemi i Norden l, 1997
oversiktsartikkel l) av andre immunopatier, bort–
sett fra ved Sjogrens syndrom, eller ved vurdering
av rejeksjonved transplantasjoner. TypingavCD4
ogCD8 celler inngårofte ietpanel avCD-typinger
ved diagnose av T-celle leukemier
(l).
De mest brukte metoder for kvantitering av
lymfocytt-subpopulasjoner baserer seg enten på
manuell isolering av cellene med etterfolgende
telling, eller med flowcytometri. Et eksempel på
forstenevnte gruppe er en immunomagnetisk
metade hvor antistoff hektes på magnetiske
monodisperse kuler som så binder seg de til aktu–
elle celler iproven (2). Cellenekan så trekkes ut og
isoleres med magnet for så å telles i Biirker-kam–
mer. Denne metoden berryttes i dag på Riks–
hospitalet. Ved flowcytometri berryttesmonaklon–
ale antistoffmed merkelapp, oftest fluorokromer.
Som kjent er telling og karakterisering av ulike
celletyperihelautomatiskehematologinstrumenter
til dels basert på flowcytometri. Det er derfor
teknisk mulig å subtype celler på flere av de
instrumentersom i dagerpåmarkedet Dette åpner
muligheten for at også ikke-spesialiserte laborato–
rierkanutfore typingavcellermedsitteksisterende
hematologi-instrument. Det vii vrere snakk om
laboratorier som ikke har et vanlig flowcytometer
eller som ikke har en provetilgang som er stor nok
til å sette opp celletypingmed f.eks. immunomag–
netiskmetade. Vi har vedvår avdeling, somdel av
en prosjektoppgave ved Hogskolen i Oslo,
21
