CUB (forkortelse af Complement subcomponents
Clr/s, .Qegf, og .B_mpl) domrener (figur l). Cubilin
indeholder intet klassisk transmembrant segment, ej
heller kendte signaler for endocytose''
2
•
Nye resuJ–
tater tyder på, at multibgandreceptoren megabn
fungerer som coreceptor for cubilin og assisterer
cubilin i forbindelse med optagelse af ligander ved
receptor-medieret endocytose';4
5 .
Hvorledes cubilin
er forankret til plasmamembranen er endnu ikke
klarlagt, men to motiver indeholdt i den aminoter–
minale region trenkes at vrere involveret i interaktio–
ner med plasmamembranen.
Bindingsregionen for intrinsic factor-B
12
i cubilin er
fundet ved systematiske molekylrerbiologiske under–
s!i)gelser. Ved mamma! ekspression af overlappende
rekorubinante fragrnenter af cubibn i Chinese
Hamster Ovary (CHO) celler blev bindingsstedet
lokabseret til CUB domrenerue 5-8
6
'
7
•
De rekorubi–
nante fragrnenter binder Intrinsic factor-B
12
med
nresten lige så h!ilj affinitet som fuldlrengde cubilin
6
'
7
•
Manglende tilf!ilrsel af B
12
fra kosten er sjreldent.
Som oftest skyldes B
1
rmalabsorption manglende
eller lav syntese afintrinsic Factor som f!illge af auto–
immune forhold. Dette ses isrer hos reldre mennes–
ker. Anderledes er situationen hos b!ilm med det arve–
lige Imerslund-Gräsbecks syndrom, idet disse pati–
enter har en helt normal syntese af intrinsic factor.
Alligevel kan de ikke optage B
12 •
For nogle
år
siden,
f!ilr cubilin var kendt, blev en 6-cM region på den
korte
arm
af kromosom
lO
udpeget til at indeholde
sygdomsgenet på baggrund af genmark!i)r-kobbngs–
analyser. Meget interessant blev genet kodende for
cubilin kort efter lokaliseret til netop denne region på
kromosom 10
2
•
Derfor faldt mistanken naturligt nok
på cubilin som den sygdomsfremkaldende faktor.
Mistanken fik yderligere grobund, da to sygdoms–
specifikke mutationer blev identificeret hos finske
Imerslund-Gräsbeck patienter i cubilingenet, inden–
for det område der koder for den intrinsic factor-B
1
r
bindende region
9
(figur
l).
Den ene og yderst sjreldne
mutation (Finnish Mutation 2, FM2) medf!i)rer, at der
indf0res multiple stopcodons i CUB domrene 6.
Resultatet er en trunkeret receptor, hvor ikke alene
intrinsic factor-B
12
bindingsstedet er defekt, men
sandsynligvis også de !i)vrige bgandbindingssteder.
FM2 mutationen medf!i)rer da også proteinuri i over–
ensstemmelse med cubilins funktion i forbindel se
med reabsorption af proteiner i nyrens proksimale
tubulus. Ved den mere hyppigt forekommende muta–
tion (FMI) er probn '
29
'
udskiftet med en leucin.
Pro'
297
er beliggende i CUB domrene 8, og netop
denne probn spiller formenttig en vigtig rolle for
CUB domrenemes struktur og foldning
79
•
For at belyse, om FMl mutationen spiller en rolie for
cubilins evne til at binde Intrinsic factor-B
12 ,
blev
både vildtype og muteret CUB5-8 udtrykt i CHO
celler og oprenset ved affinitetskromatografi. De to
proteiners affinitet for Intrinsic factor-B
12
blev under–
sjilgt ved surface plasmon resonance analyser på en
BIAcore maskine. FMI mutant CUB5-8 proteinet
bandt intrinsic factor-B
12
med en affmitet, der var
betragteligt lavere end vildtype CUB5-8 proteinets
affinitet for intrinsic factor-B
1/
(figur 2).
Tilsvarende resultater blev fundet i en cellekultur
mode!. Der skulle tilsrettes omkring 20-30 gange så
meget af FMl mutant CUB5-8 proteinet til celleme,
for at opnå samme hremning af optagelsen af ioderet
intrinsic factor-B
12
som med vildtype CUB5-8
proteinet'. FMI mutationen forklarer således med
stor sandsynlighed B
1
r malabsorptionen og den B
12 -
afhrengige anremi hos Imerslund-Gräsbeck patienter
med FMI mutationen' .
Figur 2. Surface plasmon resonance analyser
af
bindingen
af
intrinsic factor-B
12
til
BIAcore sen–
sor chips med immobiliseret vildtype eller
FMl
mutant formen
af
CUB domrenerue
S-8.
A) Bindingen af intrinsic factor-B
12
til vildtype
CUB5-8 proteinet. Flow af buffer med intrinsic
factor-B
1
r koncentrationer på 10, 20 og 50
nM'.
B)
Bindingen af intrinsic factor-8
12
til
FMl mutant
CUB5-8 proteinet. Flow af buffer med intrinsic
factor-B
1
r koncentrationer på
10,
20 og 50
nM'.
Binding af intrinsic faciOr- Binding af intrinsic factor-B
12
B
12
til vildtype CUB5-8
t
il FM l mutant CUB5-8
B
600
400
200
o
200 400 600 800 1000
o
200 400 600 800 1000
Time (s)
Time (s)
28
Klinisk Kjemi i Norden 4, 2001
