38 |
Klinisk Biokemi i Norden · 2 2020
Ph.d.-disputas: Serum/plasma-kalprotektin,
en potensielt ny markør for rask og sikker
diagnostisering av sepsis
Tom Nilsen
Gentian AS
Tom Nilsen disputerte for ph.d.-
graden ved Uppsala Universitet i
desember 2018 med tittelen “App-
lying avian antibodies in develop-
ment of serum/plasma calprotectin
particle enhanced turbidimetric
immunoassay, and its clinical per-
formance as a marker for bacterial
infections”. Hele avhandlingen kan leses her:
Introduksjon
Utviklingen av antibiotikaresistente bakterier er en
økende trussel for menneskers helse. Bakterielle infeks-
joner kan utvikle seg til sepsis og bli fatale uten effektiv
behandling. En strategi for å bremse utviklingen av
antibiotikaresistente bakterier er å redusere bruken
av antibiotika. En del av denne strategien vil være å
utvikle testmetoder som kan skille bakterielle infeksjo-
ner fra virale infeksjoner raskt, slik at korrekt behand-
ling kan begynne så tidlig som mulig.
I dag blir CRP og prokalsitonin ofte brukt for å
påvise bakterielle infeksjoner, men litteraturen anty-
der at ingen av disse markørene er optimale. Derfor
letes det etter andre markører som kan forenkle
en rask og nøyaktig diagnostisering av systemiske
inflammasjoner. Serum/plasma-kalprotektin er i
så måte en interessant kandidat fordi kalprotektin-
konsentrasjonen i blodet er signifikant forhøyet
allerede 2-3 timer etter infisering, fordi kalprotektin
frigjøres fra nøytrofile granulocytter når disse blir
aktivert. Denne mekanismen står i kontrast til CRP
som blir dannet i leveren. I kraft av å være en bio-
markør for aktivering av nøytrofile granulocytter
kan kalprotektin også skille godt mellom bakterielle
og virale infeksjoner.
Vi utviklet derfor et partikkelforsterket turbidime-
trisk immunoassay for å måle kalprotektin-konsen-
trasjonen i blodet (serum og plasma), som kan anven-
des på eksisterende helautomatiske klinisk kjemiske
instrumenter som for eksempel cobas(TM) c501,
Roche. Testen tar 10 minutter fra prøven settes inn i
instrumentet til resultatet foreligger. Prosjektet startet
med å fremstille antistoff fra egg. Vi valgte antistof-
fer fra egg fremfor mammalske antistoffer, på grunn
av fortrinn som for eksempel fravær av interferens
med humane anti-animalske antistoffer og revmatoid
faktor. I tillegg renses antistoffene ut fra eggeplom-
mene og dermed unngår hønene unødig lidelse og
komplikasjoner som blødning gjør. Vi testet assayet
både teknisk og klinisk. Det partikkelforsterkede
immunoassay ble testet teknisk på Mindray BS-400
(artikkel II). Da produksjonsprosessen var optimali-
sert (artikkel I og III), og metoden fungerte tilfreds-
stillende rent teknisk, testet med protokoller basert
på CLSI veiledninger (artikkel II), ble metoden tatt i
bruk i kliniske studier. Først etablerte vi referansein-
tervall på eldre friske personer (artikkel IV), deretter
undersøkte vi sammenhengen mellom kalprotektin
og alvorlige infeksjoner.
Klinisk utprøving
I artikkel V evaluerte vi alle pasienter som ble lagt
inn på intensivavdelingen i en definert periode som
oppfylte inklusjonskriteriene og som var forventet å
bli til neste dag. Tilsammen 110 pasienter ble inklu-
dert og 58 pasienter (52,7%) hadde en mistenkt eller
bekreftet infeksjon og fikk antibiotikabehandling.
24 av disse pasientene (41%) utviklet alvorlig sepsis
og 25 (43%) utviklet septisk sjokk på intensivavde-
lingen. CRP, prokalsitonin og leukocytter ble analy-
sert fortløpende under innleggelsen, mens plasma til
analyse av kalprotektin ble frosset ned og analysert
