![]()
10
| 4 | 2005
Klinisk Biokemi i Norden
joner, och dessa kan bestämmas i samma körning.
Kortisol ger bättre känslighet med negativt laddade
joner. Estrogenernas koncentrationer är pikomolära
och därför lyckas direkt tandem masspektrometri
vanligtvis inte utan derivatisering (19).
Metodernas känslighet beror i hög grad på mass-
spektrometern, men man kan genom rätt val av
HPLC-kolonn och buffert påverka slutresultatet. Det
är alltid nödvändigt att förrena serum- och urinpro-
ver. Utan rening stör bakgrunden bestämningen och
man uppnår inte tillräcklig känslighet.
Vi använder LC-MS/MS rutinmässigt för bestämning
av kortisol i serum och urin, kortison, 11-deoxykor-
tisol, 11
α
-hydroxyprogesteron, testosteron, andos-
tendion i serum samt tetrahydrokortisol, allo-tetra-
hydrokortisol och tetrahydrokortison i urin (tabell
1) (12, 13). Applikationer för några kliniskt viktiga
steroider beskriv i detalj nedan.
Kortisol
Kortisol i serum och fritt icke-konjugerat kortisol
i urin används vid utredning av hyper- och hypo-
kortisolism och som tilläggsundersökning vid diag-
nosticering av blodtryckssjukdom (AME,
apparent
mineralocorticoid excess syndrome
) tillsammans
med kortison och tetrahydrometaboliter i urin (THE,
allo-THF och THF)
(25)
. Immunologiska och vätske-
kromatografiska metoder påverkas av interferens
av andra endogena steroider, och läkemedel så som
prednisolon och karbamazepin. Det är svårt att få
radioaktiva interna standarder för immunokemiska
extraktionsmetoder men deutererade standarder för
LC-MS/MS är numera tillgängliga.
Vi extraherar kortisol ur serum eller urin med
diklormetan och extraktet separereras med HPLC på
en RP-18 kolonn med vatten-metanolgradient. En
analystid på 10 minuter ger tillräcklig separation,
kortisol elueras vid 4-5 minuter efter huvudpar-
ten av störande ämnen (12). Som intern standard
används deutererat kortisol. Kortisol med molekyl-
vikten 362.5 fragmenteras till en negativt laddad
jon enligt följande: 361 ----> 331 med förlust av
30 amu, vilket sannolikt motsvarar en klyvning av
kol-kol-bindningen mellan atomerna 20 och 21.
Variationen mellan körningarna rör sig kring 4-8%
(CV) men känsligheten beror på apparaturen. Med
API 2000 (Applied Biosystems) når vi en känslighet
på 800 pmol/L (kvot signal/bakgrund=3) och med
(Fortsat fra side 9)
(Fortsætter side 12)
API 2000 API 3000
Analyt
Amu Mode Fragmentering
Injektions-
volym
µL
Känslighet
nmol/L
S/N = 3
Känslighet
nmol/L
S/N = 3
Kortisol
362,5 ESI- 361,1 >---> 331
5
0,8
0,02
Kortison
360,4 ESI- 359,1 >---> 328,8
2
17-OH-Progesteron 330,5 ESI+ 331,2 >---> 96,1; 109,0 25
0,2
11-Deoxykortisol
346,5 ESI+ 347,2 >---> 109,1
25
0,3
Tetrahydrokortisol
366,5 ESI- 365,2 >---> 335
5
0,5
Allotetrahydrokortisol 366,5 ESI- 365,2 >---> 335
5
0,8
Tetrahydrokortison 364,5 ESI- 363,1 >---> 333,3
5
0,4
Testosteron
288,4 ESI+ 289,1 >---> 97,2
25
0,1
0,03
Androstendion
286,4 ESI+ 287,1 >---> 97,2
25
0,1
Dihydrotestosteron 290,5 ESI+ 291,1 >---> 255,1
25
10
Pregnenolon
316,5 ESI+ 317,4 >---> 299,3
25
6
17-OH-Pregnenolon 332,5 ESI+ 350,2 >---> 133,2
50
50
ESI+ 333,2 >---> 133,1
50
100
Lista på steroider som rutinmässigt bestäms med LC-MS/
MS på Kvinnoklinikens laboratorium.
